简论唾液腺唾液腺染色制片办法和对比

摘 要 文章以果蝇唾液腺的染色制片方法为例，以果蝇幼虫的培养养，及幼虫在性别，年龄对制片效果影响，和制片方法上的一些比较，从而得出好的制片方法和实验结果。
关键词 果蝇；唾液腺；制片方法
唾腺普遍存在于双翅目昆虫中，因为唾液腺细胞核中的染色体巨大，易观察横纹。体摘自：硕士论文格式www.618jyw.com
联会等特点。易发现重复，倒位，易位等染色体结构变异，从而使唾腺染色体成为细胞遗传学进化遗传学和分子遗传学研究的不可多得的好材料。特别在双翅目昆虫的研究中，唾腺细胞的染色和制片技术，显的尤为重要。本文博众家之长，兼笔者实践经验，尤重视在材料上的选择、方法上也有改进。采用此方法，染色体易伸展，背景清晰，颜色对比高，获得很好的染色的图象。

一、材料与方法

1.果蝇幼虫的培养

（1）培养基为常见的玉米培养基。玉米粉10克，红塘13克，琼脂粉0.7克，酵母粉2克，丙酸0.3ml，加蒸馏水100ml。 （2）培养基要求松软，含水量较高，营养丰富，发酵良好。 （3）放入5-6对果蝇在18-20℃下培养，幼虫出现后可将起放入15-18℃低温培养。利于幼虫充分发育。
（4）实验时选用肥大，好动的雌性幼虫作材料。

2.唾腺的剥离

（1）取一幼虫放在滴有一滴0.7%生理盐水的干净载玻片上。实验者两手各拿一支解剖针压住幼虫尾端1/3处，用右手的解剖针，压住头部，水平拉动，即可拉出一对透明棒状腺体。清除其上易剥落的脂肪，移走其他杂物。
3.制片
（1）解离。将腺体周围的生理盐水吸走，滴1-2滴1N盐酸，在室温下解离5分钟左右，然后剥离其上附着的脂肪体。
（2）染色。滴蒸馏水在一旁，用吸水纸小心吸去盐酸，反复几次。加1-2滴改良苯酚品红染液于腺体上，染色10-15分钟。
（3）压片。小心吸去多余染液，用蒸馏水将染上色的腺体冲在另一个干净载玻片上（小心，别丢失了腺体）。滴上一滴45%醋酸，改上干净的盖片，用滤纸吸去多余的染液后，将滤纸条裹紧载片，左手微用力压住盖片对角，不让其滑动，右手拇指适度用力垂直向下压片，染色体臂分开。
（4）镜检。压好的临时装片直接在显微镜下观察，可以看到有染色体臂充分伸展，横纹带纹清晰。背景干净。选择好的细胞图象，用显微摄影照片，或可用石蜡封片，制成临时标本，进一不制成永久装片。

二、结果与讨论

以上实验中，应该着重注意以下几点；
（1）培养基宜加较多的糖，酵母（提供充足的营养），松软的培养基（含水较多）且低温下（15-18℃），易培养出肥大的果蝇幼虫，其唾腺发达。
（2）亲本密度对幼虫发育的影响。培养基中放入5-6对果蝇，不能太多，培养基营养成分固然重要，但其中的幼虫密度，也会影响幼虫的发育。成虫交配后12小时左右就必须将成虫转移。充足的空间适于果蝇幼虫的生长。
（3）幼虫性别对制片的影响。实验证明雌性更利于实验，雌性三龄幼虫唾腺细胞染色体易被压伸展，成功率较高。
（4）幼虫年龄对制片的影响。实验取材以上午10点左右为好，并选分肥大，好动的幼虫，其腺体细胞易压破，染色体易伸展，着色，而不思动的幼虫可能是快进入蛹期的老龄幼虫，细胞中染色慝难被压伸展横纹也很模糊。
（5）拉出来的唾液腺上常常附有一些脂肪体，直接用解剖针很难分离，还易使脂肪体附在解剖针上，而用1N的盐酸解离后，只需用针尖轻轻拨动就能分离脂肪体。
（6）唾腺在整个过程中一直要保持湿润，不能干燥。
（7）用45%的醋酸处理后，就能得到较干净的背景。也有用背景液和冲洗液来消除背景杂色，获得干净的背景效果。只是对于它们的配置略有繁冗，不如直接用45%的醋酸来的快。
（8）也有主张用冰冻压片，其间和本实验一样的需要转移唾腺，首先来说冰冻压片效果不明显，冰冻处理载片也麻烦，其次，唾腺本来就小，转移中易丢失。即使在本实验中，也可用吸走盐酸的方法吸去多余的染液，而不一定转移腺体，因为这一步需要很谨慎。
（9）压片十，拇指适当用力垂直下压，不主张压片中、有揉动，那样极易搓动盖片。
参考文献：
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作者简介：王 玉（1983-），女，四川江油人，遂宁二中实验学校，中学二级，理学学士，主要从事中学生物教学工作。