试论研究进展油菜愈伤组织诱导进展

摘　要：在外植体取材及培养基等因子对油菜愈伤组织的诱导影响方面的研究进行了概述，重点综述了培养基中激素的作用，并对各种因子影响的效度进行了讨论。
关键词：油菜；愈伤组织；外植体；基因型；培养基
油菜是十字花科作物，是我国乃至整个世界最主要的油料作物之一，其籽粒是制浸油脂原料的主要品种之一。作为具有重大价值的经济作物，油菜的研究一直受到了较大的关注。目前全球许多机构运用各种现代生物技术对油菜进行细致的研究，主要选取花药、子叶、胚轴、胚根及原生质体培养的研究和植物激素如油菜素内酯的研究。本文就油菜愈伤组织作为综述对象，从培养基的配制类型方面加以探讨。

一、萌发培养基

大多数试验对萌发培养基没有特别研究，均是将消毒后的种子接种于无激素的■MS培养基上培养，有的试验只采用了■MS量元素或者是采用MS。但佘小玲对萌发培养基研究表明，萌发培养基中有无激素直接影响种苗的质量。在萌发培养基中加入6-BA2　m叭和NAA0.5　mg/L的种苗长势最好。来源于有激素培养基种苗的下胚轴，较无激素培养基种苗的下胚轴愈伤组织发生早，形成快，且高峰期来得快，最终诱导频率高，从而愈伤组织的芽苗分化频率也高。

二、诱导培养基及相应分化培养基

使外植体脱分化形成愈伤组织进而器官发生是植株再生的重要方式。胡玉、佘小玲等均是先使子叶或下胚轴完全脱分化形成愈伤组织，再从愈伤组织诱导芽。胡玉欣以甘蓝型油菜豫油2号为材料发现最适愈伤组织诱导培养基为MS+ZT1　mg/L+NAA0.5　mg/L+2，4-D0.2　mg/L，最适分化培养基为MS+ZT4　mg/L+0.2　mg/L。佘小玲通过湘油13号的下胚轴培养发现以MS+2，4-D　0.3　mg/L+6-BA3　mg/L为诱导培养基，以MS+GA30，5　mg/L+6-BA3　mg/L为分化培养基最好。以上结论各不相同，很可能是不同品种对最适培养基及激素组合要求不尽相同的故。
三、激素
在以不同基因型的油菜下胚轴和子叶为外植体的离体培养中，基因型和激素浓度再生频率的影响均达到极显著水平，激素的影响大于基因型，且两者之间存在显著的互作效。在油菜子叶和下胚轴的培养中，应用较多的激素是6-BA，NAA，2，4-D。6-BA对细胞的再分化有决定性作用，对芽的正常发育也有很大影响。石淑稳等报道，6-BA浓度为1.5　mg/L和2.5　mg/L时，子叶柄的芽再生率可达90%以上，且90%以上的芽能形成正常植株；在2.5　mg/L以上时，再生芽顶端生长势弱，产生较多的叶状芽，不易形成茎和发育成完整植株。许本波等认为，6-BA浓度达到4.0　mg/L时，下胚轴畸形苗比例增大。当培养基中未添加生长素NAA时，下胚轴变得白而纤细；但当NAA浓度超过0.2　mg/L，下胚轴所形成的愈伤会产生大量的毛状根，其芽的再生频率会显著下降；当NAA浓度超过0.5　mg/L，则明显抑制不定芽分化；同时，随着NAA浓度的提高，玻璃化现象越明显。唐桂香等认为，3　mg/L6-BA+0.15　mg/LNAA的分化频率较高。2，4-D能提高愈伤分化率、质量和时间，2，4-D对诱导油菜愈伤组织是必须的。Radke等在白菜型和甘蓝型油菜下胚轴的转化试验中，受体在预培养和共培养时加入2，4-D，使一些基因型产生高频率的转化，认为外植体细胞在受到农杆菌的浸染、Kan的选择及抗生素的作用之下，具有分裂能力和再生能力的细胞比例减少，需用2，4-D诱导产生器官性的愈伤或芽原基，促进转化细胞的芽再生。为了获得较高的再生频率，在进行遗传转化等应用研究时，还需要在品种之间进行选择，并针对所采用的材料进行激素的筛选试验。
源于：标准论文www.618jyw.com

四、油菜素内酯

有实验表明，油菜素内酯（BR）单独处理油菜下胚轴既能诱导愈伤组织形成，又能分化出根。当BR与几种激素组合时明显看到愈伤组织的增效反应，特别是BR与IAA组合不仅愈伤组织诱导频率高于BR，IAA单独使用的，也高于作用强的生长素2，4－D单独使用的。
实验证明，无激素培养基种苗的下胚轴愈伤组织发生早，形成快，因此，在培育无菌苗的时候应采用MS基本培养基。同时，油菜素内酯（BR）也有利于油菜愈伤组织的形成。
参考文献：
［1］石淑稳，周永明.甘蓝型油菜下胚轴培养和高频率芽再生技术的研究［J］.中国油料作物学报，1998，20（2）：1-6.
［2］郎春秀，胡张华，刘智宏，等.油菜农杆菌转基因体系的建立及转PEP反义基因油菜的获得［J］.浙江农业学报，1999，11（2）：55-58.
［3］王景雪，孙毅，刘少翔，等.油菜下胚轴高频率植株再生因素研究［J］.作物学报，1997，23（3）：376-379.
（作者单位　山东莒县）