糖肾方颗粒逆转早期糖尿病肾病肾损害探讨

一、研究目的本项目拟在前期研究的基础上,通过对临床期前的糖尿病肾病(DN)患者及链脲佐菌素(STZ)所致DN模型大鼠的观察,进一步探讨DN与中医伤寒论少阴病阳虚证之间的病证关系,并对糖肾方颗粒的治病机理作进一步研究,特别是对尿及肾皮质21-N-乙酰—B—D-氨基葡萄糖苷酶(21—NAG)、大鼠肾脏nephrin蛋白的表达以及肾小球基底膜足细胞变化的影响,以期按照以药测证的方法寻找药物作用的靶点,并尝试以此为基础来阐释DN的发病机理及中医辨证规律,以对21世纪人类健康杀手——DN的有效防治作出贡献。二、研究内容与方法1.临床研究将符合西医早期糖尿病肾病(IDN)诊断标准者96例患者,分为治疗组48例和对照组48例,两组均采取相同的基础治疗,包括糖尿病健康教育、糖尿病饮食、控制血压、血糖。对照组在此基础上加服卡托普利(开搏通)25mg/次,天天2次;治疗组在此基础上加服糖肾方颗粒,每包8克,每次2包,天天2次;治疗组与对照组均以8周为一疗程,服药一个疗程。观察患者中医症状、舌、脉、血压、脉搏、空腹血糖(FBG)、餐后2h血糖(P2hBG)、血清肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)、尿微量白蛋白(mALB)等各种情况,来分析糖肾方颗粒对IDN肾脏的保护机制。2.实验研究将SPF级雄性SD大鼠采用一次性腹腔注射STZ(剂量为55mg/kg)建立IDN模型。将模型成功的大鼠随机分为DN早期干涉组(I):确定成模第二天即予随机分组:分为糖肾方颗粒低剂量治疗组(TNI)、糖肾方颗粒高剂量治疗组(TGI)、开博通对照组(KI)、模型对照组(MD)、正常对照组(ND)。DN晚期干涉组(O):成模后二周予随机分组:分为糖肾方颗粒低剂量治疗组(TNO)、糖肾方颗粒高剂量治疗组(TGO)、开博通对照组(KO)、模型对照组(MD)、正常对照组(ND)。各组大鼠灌胃给药,开搏通组用开搏通6.25mg/kg/d灌胃。糖肾方颗粒低剂量组每只予糖肾方颗粒溶液4g/kg/d灌胃;糖肾方颗粒高剂量组每只予糖肾方颗粒溶液8g/kg/d灌胃;模型对照组与正常对照组用生理盐水5ml/kg灌胃。上述各组灌药1次/d,连续给药共8周。各组大鼠按25g/只进食,饮水自由,实验中不予使用胰岛素和其它降糖药。观察各组大鼠一般情况,包括对饮水量、尿量、皮毛状况、精神状态等进行观察,测体重、肾重,计算肾重/体重指数。检测血糖、24h尿蛋白变化情况,紫外分光光度法测大鼠尿、肾皮质NAG的OD值,并计算其酶活性,免疫组化方法检测大鼠肾脏nephrin蛋白的表达,并用电镜观测大鼠的肾脏肾小球基底膜足细胞的变化。三、研究结果1.临床研究观察到在血糖控制的基础上,糖肾方颗粒治疗早期DN的总有效率为58.33,对照组总有效率为47.92(P＞0.05)。治疗组中医证侯总有效率91.67明显优于对照组总有效率(54.17)(P＜0.05)。两组均能减轻早期DN患者症状积分、降低早期DN患者FBG、P2hBG、24hUAE及mALB、尿NAG、CRE各项指标:治疗组在改善早期DN患者临床症状、降低FBG、P2hBG、CRE等方面均明显优于对照组(P＜0.05)。治疗组在整个观察过程中肝功能无改变,未出现不良反应,证实糖肾方颗粒无毒副作用,有效安全。2、动物实验中观察ND大鼠,精神状态良好,反应灵敏,毛色有光泽,进食正常。MD大鼠及各治疗组大鼠开始表现为多饮、多食、多尿,大便稀塘,精神萎靡,反应迟钝,毛色干枯,光泽较差,拱背蜷卧。随着进展,以上表现逐渐好转,且各治疗组经治疗后,缓解程度较之MD明显。ND的体重升高明显,次与次之间对比均有明显性差异;其余几组在造模后早期都有明显的体重下降过程,但随着干涉及病程的进展,体重逐渐上升。统计结果显示模型组及治疗组大鼠第二次体重最低,TNI、KI、TNO、TGO、KO均有明显性降低;第三、四次体重与第二次体重相比均有明显性增加;与第一次体重相比,TNI、TGI、KI、TNO、ND的最后一次体重均有明显性增加;组与组之间相比无明显性差异。治疗前后的血糖降低明显,具有明显性差异,而各组之间相比无明显性差异。右肾重以及肾重体重指数各组相比无明显性差异。尿NAG模型组与其余各组相比明显性增高,肾皮质NAG无明显性差异。各治疗组治疗后24hupro明显下降,与治疗前相比P＜0.05,具有明显性差异;治疗后各组24hupro与MD、KO组相比明显下降,P＜0.05,具有明显性差异;而其余各治疗组间差异不明显,P＞0.05。治疗后KI组的大鼠肾小球nephrin蛋白的表达均匀光密度明显低于其余各组,与各组相比P＜0.05,具有明显性差异;而TNI、TGO、TNO治疗后各组之间两两相比无明显差异,且与ND组相比也无明显性差异P＞0.05,但是与TGI、MD、KO组相比表达明显减少,P＜0.05;但TGI、MD、KO组各组大鼠肾小球nephrin蛋白的表达均匀光密度两两相比无明显差异P＞0.05。透射电镜下可见大鼠肾小球血管袢、基底膜及足突细胞经糖肾方颗粒及开搏通干涉治疗后,糖肾方颗粒各组,均得到了不同程度的改善,以TGO改善最为明显,而TGI改善不明显,但无加重趋势;开搏通组基底膜及足突未见明显改善,甚至有加重的表现,尤以KO明显。四、结论1、少阴病阳虚证与DN之间具有紧密的病证相关性2、糖肾方颗粒可以明显改善DN患者的临床症状,提高患者的生活质量。可以延缓或逆转早期DN(或临床期前)的肾损害。3、糖肾方颗粒无毒副作用,临床使用安全。4、实验研究显示糖肾方颗粒组不论早期与晚期应用,均有较好的调整DN异常的肾小球nephrin蛋白的表达的作用,使其更加接近正常对照组的表达,但同时也提示,在早期时不可大剂量应用。5、糖肾方颗粒在改善DN蛋白尿方面具有明显效果,早期干涉与开搏通疗效无明显性差异,而晚期干涉则糖肾方颗粒的疗效优于开搏通。6、对大鼠尿及肾皮质内的NAG具有调整作用,使其更接近正常,从而具有保护肾小管的作用,由此而起到保护肾功能的作用。7、糖肾方颗粒可以通过改善DN大鼠肾小球基底膜及足细胞的变化而起到逆转与保护DN早期肾损害的作用综上所述,糖肾方颗粒通过对DN大鼠肾小球nephrin蛋白的表达的影响、对大鼠尿及肾皮质内的NAG的调整、蛋白尿的降低、改善DN大鼠肾小球基底膜及足细胞的变化等,具有全面保护肾功能的作用。【关键词】：早期糖尿病肾病糖肾方颗粒NAGnephrin足细胞
【论文提纲】：中文摘要3-6Abstract6-12引言12-151、临床表现的病理基础122、猜测肾脏损害的临床和实验室指标123、机理的深入探讨12-134、DN的治疗135、动物模型的研究136、中医药关于DN的现代研究13-15第一部分临床研究15-251研究对象及病例来源151.1研究对象151.2病例来源152诊断标准15-162.1DM诊断标准152.2DN分期标准15-162.3DN诊断标准163纳入标准及排除标准16-173.1纳入标准163.2排除标准16-174研究方法17-204.1分组及基础处理174.2给药方法17-184.3观察指标184.4疗效评定标准18-194.5安全性评价19-204.6观察、记录、总结的要求204.7原则204.8统计学处理205研究结果20-255.1病例均衡性分析20-215.2临床疗效分析21-245.3安全性检测24-25第二部分实验研究25-361实验材料25-261.1实验动物251.2饲料251.3实验药物以及剂量251.4主要仪器25-261.5实验试剂262实验方法26-292.1动物饲养262.2动物模型制作262.3动物分组26-272.4治疗方法272.5标本收集及组织处理272.6观测指标与方法27-292.7统计方法293实验结果29-363.1一般情况293.2体重29-303.3各组大鼠肾重(g)、肾/体指数、尿NAG、肾皮质NAG比较30-313.4各组大鼠治疗前后血糖比较31-323.5各组大鼠治疗前后24hupro比较结果32-333.6各组大鼠肾小球nephrin蛋白的表达均匀光密度比较结果33-353.7透射电镜结果35-36第三部分讨论36-521病因病机的探讨36-372病证相关性探讨37-383辨证组方的分析38-394DN期别的选择39-405糖肾方颗粒临床疗效分析40-425.1总体疗效的改善405.2临床症状的改善40-415.3降低血糖415.4降低尿mALB,24hpro,尿NAG,保护肾功能41-425.5无毒副作用,使用安全426实验部分42-486.1动物模型的探讨43-456.2糖肾方颗粒治疗实验性大鼠DN机制探讨45-48参考文献48-50结语50-52一、结论50二、本课题的创新点50三、展望50-52第四部分文献研究52-721DN研究的历史52-541.1中医有关DN的研究历史52-531.2现代医学有关DN的研究历史53-542DN研究的现状与发展趋势54-583研究方法、成果与展望58-693.1临床表现的病理基础583.2猜测肾脏损害的临床和实验室指标58-603.3机理的深入探讨60-623.4动物模型的研究62-633.5中医药关于DN的现代研究63-69参考文献69-72附录72-80附录1相关英文缩写词72-73附录2临床研究观察表73-75附录3大鼠肾脏NEPHRIN蛋白免疫组化图75-77附录4电镜观察结果77-79附录5攻读博士学位期间发表论文及参编论著79-80致谢80